wntβcatenin信号通路 Wnt 信号通路对骨髓瘤病的影响

王晋+郑亚萍

摘 要：意图： 阻断Wnt信号通路对多发性骨髓瘤骨病效果；办法： 搜集30例确诊为多发性骨髓瘤患者和18例健康对照组的临床资料、血清；选用ELISA办法测定血清SDF-1，DKK-1水平；体外培育多发性骨髓瘤细胞株，别离参加35ng/ml SDF-1和100ng/mlDKK-1，经过 Western Blot 办法调查DKK-1的表达量；选用 SPSS Statistics 13. 0进行统计学剖析。当P<0. 05时以为存在统计学差异。成果：MM患者（n=30）血清SDF-1水平显着高于健康对照（n=18） （（3724.5土 1586.8）pg/ml VS （3028.6±587.4）pg/ml， P =0.015）。MM 患者血清 DKK-1 水平亦显着高于健康对照[（3814.6土3487. 8）pg/ml VS （1881.3土657.8）pg/ml，P=0.029]。在体外培育MM细胞株，选用35ng/ml SDF-1效果于MM细胞和100ng/mlDKK-1效果于MM细胞，Western Blot成果：显现在SDF-1介导下，DKK-1的表达量较对照组及SDF-1组都有显着升高（P <0.005）。定论 SDF-1与DKK-1一起介导多发性骨髓瘤。

关键词：SDF-1 DKK-1 多发性骨髓瘤

基质细胞衍生因子（Stromal cell derived factor， SDF-1）是经过CXCR4受体调理成骨体系。SDF-1主要是由骨髓间充质干细胞（bone marrow derived stroma cell，BMSC）排泄，而SDF-l具有促进破骨细胞（Osteoclast ， OC）活化及骨吸收效果。近年来SDF-l在骨髓瘤骨病中的效果逐漸遭到重视，与其配体CXCR4趋化瘤细胞。但SDF-1/CXCR4对多发性骨髓瘤患者（multiple myeloma， MM）成骨效果的影响现在没有见报导，在MM患者血清SDF-l与DKK1二者是否相互效果促进骨髓瘤骨病发作尚不清晰。

一、资料和办法

1.材 料

搜集2014年10月至2015年6月搜集漯河市中心医院血液科多发性骨髓瘤病例，30例；搜集2014年10月与漯河市中心医院体检中心进行健康体检，18例；细胞株：人多发性骨髓瘤细胞株，漯河医学高级专科学校科研中心贮存。RPMI1640培育（ Gibcol），人淋巴细胞别离液（TBD），胰蛋白酶（Gibco公司），胎牛血清（ 四季青），兔抗actin（ 多克隆抗体， Abcom），兔抗DKK-1（ 多克隆抗体，Sigma），辣根过氧化物酶符号的山羊抗兔 IgG抗体（ 碧云天）。

2.办法

（1）血清别离 搜集患者医治前及医治后或许复发及健康成人外周血各10mL，EDTA抗凝，3000rpmXl5min离心，取上清液。ELISA检测血清中SDF-1的含量。

（2）MM培育1640培育基中培育，2-3天换液，当细胞密度大于1XlO6/ml时，进行传代， 参加SDF-1剌激，将细胞分为两组，其一参加35ng/ml SDF-1，另一组参加100ng/ml DKK-1溶液，培育48h后搜集细胞，提取蛋白。Western Blot检测DKK-1蛋白表达量。

（3）统计学处理：选用 SPSS13.0 软件进行方差剖析 数据以均数±标准差（x±s）标明，P <0.05 阐明差异有统计学含义。

二、成果

MM患者（n=30）血清SDF-1水平显着高于健康对照（n=18） （（3724.5土 1586.8）pg/ml VS （3028.6±587.4）pg/ml， P =0.015）。MM 患者血清 DKK-1 水平亦显着高于健康对照（（3814.6土3487. 8）pg/ml VS （1881.3土657.8）pg/ml，P=0.029）。在体外培育MM细胞株，选用35ng/ml SDF-1效果于MM细胞和100ng/mlDKK-1效果于MM细胞，Western Blot成果：显现在SDF-1介导下，DKK-1的表达量较对照组及SDF-1组都有显着升高（P <0.005）。

三、评论

研讨证明（安排形态学），MM患者的骨吸收添加的一起破骨细胞（OC）数量和活性也相应在添加。而肿瘤细胞与OC之间沟通亲近，相互促进，构成恶性循环[1]。研讨标明，Wnt信号通路能够调理骨的代谢和保持骨质稳态[2]，DKK-1是Wnt信号通路的一种可溶性按捺剂[3]。DKK-1阻断剂可经过阻断Wnt信号通路而阻断成骨细胞分解进而调理成骨细胞。本试验首要比较了MM患者组与健康对照组中血清SDF-1水平，发现MM患者血清SDF-1 水平较对照组显着升高，具有统计学含义。

在MM疾病中，SDF-1和DKK-l的相关是一种特有状况。主要是表达在造血干细胞和淋巴细胞外表。SDF-lct关于破骨效果的增强已得到广泛认可[4]。其能够添加0C生机和骨吸收活性，破骨激活的相关基因包含RANK，RANKL，TRAP等表达添加。但在MM疾病状况中，本研讨结合血清SDF-1和DKK-l的水平，为了进一步深层的解说SDF-1与DKK-1之间在蛋白之间的联系，及他们之间的相关性，体外培育MM细胞株，提取蛋白用Western Blot检测，研讨成果显现，SDF-1能够促进DKK-1的表达上调（如图1），可推断，Wnt信号通路遭到按捺，DKK-1关于破骨效果有增强的效果，也使成骨效果削弱，然后打破了骨吸收与骨构成的动态平衡。

为了进一步研讨其机制，有研宄人员经过树立敲除CXCR4基因的小鼠模型，因此进一步证明SDF-1/CXCR4轴参加并介导成骨的分解，并且对今后发育骨豁起到了一个十分重要效果。本研宄立异性地发现SDF-l和DKK-1亲近效果，DKK-1按捺剂现在已进入临床试验阶段。

参考文献

[1] Roodman GD. Pathogenesis of myeloma bone disease[J]. Blood cells，molecules & diseases， 2004， 32 （2） ：290 - 2.

[2] Hosogane N. Stromal derived factor-1 regulates bone morphogenetic protein 2-induced osteogenic differentiation of primary mesenchymal stem cells [J]. The international journal of biochemistry cell biology， 2010， 42（7）：1132 -41.

[3] Zhu W， Liang G， Huang Z， et al. Conditional inactivation of the CXCR12 receptor in osteoprecursors reduces postnatal bone formation due to impaired osteoblast development [J]. The Journal of biological chemistry ， 2011， 286（30）：26794 – 805.

[4] Zannettino ACff. Elevated serum levels of stromal-derived factor—lalpha are associated with increased osteoclast activity and osteolytic bone disease in multiple myeloma patients [J]. Cancer research， 2005， 65（5）：1700-9.endprint